【第1編 難培養微生物の研究方法】 |
第1章 海洋性VBNC微生物とその検出法(木暮一啓) 3 |
1. 天然水界中の細菌群集 4 |
2. “休眠細胞”はいない 4 |
3. なぜ培養できないのか 6 |
4. 今後どれだけの細菌が培養できるか 8 |
5. おわりに |
第2章 難培養微生物の具体例,共生細菌Symbiobacterium thermophilum(上田賢志,別府輝彦) |
1. はじめに 10 |
2. トリプトファナーゼ生産菌の探索 10 |
3. S.thermophilumが示す新しい分類学的性質 12 |
4. 普遍的なSymbiobacterium属細菌 15 |
5. 透析を利用したS.thermophilumの純粋培養 15 |
6. Bucillusの役割は環境を整えること 17 |
7. おわりに 18 |
第3章 複合微生物系の難培養微生物新規分離手法と複合微生物系有効活用利用法(倉根隆一郎) |
1. はじめに 20 |
1.1 現在ハンドリング出来る微生物種等には限界がある 21 |
1.2 未知の微生物を求めて新大陸の複合生物系へ 21 |
1.3 複合生物系プロジェクト 22 |
2. ゲルマイクロドロップ・フローサイトメトリー法による難培養微生物の新規分離培養法の開発 22 |
2.1 難培養性微生物の分離 23 |
2.2 分離・培養した微生物の性質 25 |
2.3 まとめ 25 |
3. 複合系微生物機能解析探索自動化システム(HTS;High Throughput Screening)の開発 26 |
3.1 複合微生物系機能解析システム 26 |
3.2 複合微生物系由来の新規生理活性物質の探索 27 |
3.3 まとめ 27 |
4. 蛍光消光等分子間相互作用を利用した複合生物系の迅速検出法の開発 27 |
4.1 蛍光消光現象を利用した特定遺伝子検出 27 |
4.2 複合微生物系への適用 28 |
4.3 まとめ 28 |
5. 石油系化合物分解微生物コンソーシアの培養制御技術の開発 29 |
5.1 石油分解微生物コンソーシアの機能強化・向上技術 29 |
5.2 フェノール分解微生物コンソーシアの培養制御技術の開発 30 |
6. おわりに 31 |
第4章 環境サンプルの16S rDNAクローン解析法とT-RELP解析法(本郷裕一) |
1. 16SrDNA解析の目的 33 |
2. 16SrDNAクローン解析 33 |
2.1 DNA抽出 33 |
2.2 PCR増幅 34 |
2.3 クローンライブラリーの作成とインサートチェック 36 |
2.4 配列決定とphylotypeへの分類,キメラ判定 36 |
2.5 系統解析 37 |
2.6 多様性の評価 37 |
2.7 群集構造の比較 39 |
2.8 クローン解析における問題点 40 |
3. T-RELP解析 41 |
3.1 DNA抽出とPCR増幅 41 |
3.2 制限酵素処理 42 |
3.3 データ解析と問題点 42 |
第5章 キノンをバイオマーカーとして用いる環境微生物群集の解析(平石明) |
1. はじめに 45 |
2. キノンの分布とバイオマーカーとしての意義 46 |
3. キノン分析法 50 |
4. キノン分析の応用 51 |
5. データの解釈および数量解析 53 |
6. おわりに 55 |
第6章 定量的PCR法を用いた難培養微生物のモニタリング(金川貴博,蔵田信也) |
1. 定量的PCR法の概要 57 |
2. リアルタイム定量的PCR法 57 |
2.1 DNA結合性蛍光色素を用いる手法 60 |
2.2 蛍光標識プローブを用いる手法 61 |
2.2.1 FRETを利用する蛍光標識プローブ 61 |
2.2.2 蛍光色素と塩基との相互作用による蛍光消光を利用するプローブ 63 |
2.3 蛍光標識プライマー法 65 |
3. 内部標準PCR法 66 |
4. 競合的PCR法 66 |
5. MPN-PCR法 67 |
6. 定量的PCR法の難培養微生物定量への応用 67 |
第7章 難培養微生物のin situ検出法(山口進康,那須正夫) |
1. はじめに 69 |
2. 微生物の現存量測定法 69 |
3. 生きている微生物の検出・定量 70 |
3.1 蛍光活性染色法 70 |
3.2 DVC(Direct viable count)法 72 |
3.3 マイクロコロニー法 73 |
4. 特定の微生物の検出・定量 74 |
4.1 蛍光抗体法 74 |
4.2 蛍光in situハイブリダイゼーション(Fluorescence in situ hybridization;FISH)法 74 |
4.3 in situ PCR法 77 |
5. 省力化・自動化 79 |
6. おわりに 81 |
第8章 機能遺伝子による解析とそのmRNAの検出(野田悟子,大熊盛也) |
1. はじめに 83 |
2. 環境中の機能集団の検出 83 |
3. 環境中の機能遺伝子のmRNAの検出 85 |
4. モニタリングとsingle cell levelでの検出 86 |
5. 窒素固定細菌の検出と解析例 87 |
5.1 シロアリ共生系の窒素固定に関わる微生物の解析 87 |
5.2 海洋の窒素固定に関わる微生物の解析 90 |
6. 硝化と脱窒に関わる微生物の解析例 90 |
7. おわりに 91 |
第9章 DNAマイクロアレイを用いた環境サンプル中の微生物群集の解析(江崎孝行,大楠清文,河村好章) |
1. 系統マイクロアレイの作成 94 |
2. 土壌のDNAの抽出 95 |
3. 遺伝子増幅 96 |
4. マイクロアレイとの反応 98 |
4.1 結果の解析方法 98 |
4.1.1 病原体および特定の機能を持った菌群のScreenig 98 |
4.1.2 優位な菌の系統解析 99 |
4.1.3 菌種レベルの解析 100 |
5. おわりに 100 |
【第2編 自然環境中の難培養微生物】 |
第1章 メタン生成古細菌と嫌気共生細菌―嫌気性廃水処理プロセスを例に―(関口勇地,鎌形洋一) |
1. はじめに 103 |
2. 嫌気環境下の微生物 103 |
3. 嫌気的有機物分解―嫌気共生細菌とメタン生成古細菌との共生― 106 |
3.1 メタン生成古細菌 107 |
3.2 共生細菌 108 |
3.3 その他の微生物 109 |
4. 嫌気性廃水処理プロセス 109 |
4.1 嫌気性廃水処理プロセスにおける各種共生細菌 109 |
4.2 グラニュール汚泥の構造を決定する糸状性細菌 |
4.3 他の未培養微生物群とそれらを解析するためのアプローチ 113 |
5. おわりに 114 |
第2章 環境中の多様な石油分解菌(渡邉一哉) |
1 はじめに 116 |
2 多様な石油分解菌を単離する試み 117 |
2.1 標識基質を用いた直接プレート法 117 |
2.2 連続培養集積法 118 |
2.3 生物膜集積法 120 |
3. より多様な石油分解菌を理解するために 120 |
3.1 中間代謝産物シェア 121 |
3.2 分解促進因子 121 |
3.3 細胞間シグナリング物質 122 |
4. おわりに 123 |
第3章 有機性廃棄物の生分解処理と難培養微生物(春田伸,五十嵐泰夫) |
1. はじめに 125 |
2. 培養法に基づく微生物研究 125 |
3. 有機物分解過程への分子生物学的手法の適用 126 |
4. 培養を経ない手法による微生物の検出 127 |
5. おわりに 130 |
第4章 深海極限環境における微生物学的多様性と難培養性微生物(加藤千明,荒川康) |
1. はじめに 132 |
2. 深海のコールドシープ域における微生物学的多様性と難培養性微生物 134 |
2.1 コールドシープ底泥サンプルの回収と分子生態学的解析 134 |
2.2 バクテリアにおける微生物学的多様性解析 135 |
2.3 アーキアにおける微生物学的多様性の特徴 140 |
2.4 コールドシープ環境におけるイオウ循環モデル 141 |
2.5 コールドシープ環境の硫酸還元細菌 143 |
3. 本当に難培養性?まだ培養に成功していないだけ? 145 |
4. おわりに 146 |
第5章 家畜と難培養微生物―家畜消化管内微生物研究の最前線―(竹中昭雄) |
1. はじめに 148 |
2. 培養によらない細菌の検出 149 |
3. 家畜消化管内細菌の分子系統解析 150 |
4. ルーメン内難培養微生物への分子生物学手法の応用 153 |
5. 人工ルーメンとメタゲノム解析 154 |
第6章 難培養微生物を含むヒト口腔内細菌叢の解析(坂本光央,辨野義己) |
1. はじめに 157 |
2. ヒト口腔スピロヘータ 158 |
3. 歯周病原性細菌の検出・定量 159 |
4. 口腔内の微生物群集の構造 159 |
5. 新規口腔内細菌(ファイロタイプ)の検出 161 |
6. 微生物群集構造解析の新たなアプローチ 161 |
7. おわりに 163 |
第7章 難培養性細菌を含むヒトの大腸内細菌叢の解析(林秀謙,辨野義己) |
1. はじめに 165 |
2. 16S rRNA遺伝子ライブラリー解析 165 |
3. 16S rRNA遺伝子を使用したフィンガープリンティングによる大腸内細菌叢の解析 1668 |
4. Fluorescent in situ hybridization(FISH)による大腸内細菌叢の解析 170 |
5. 特異的プライマーによる検出 170 |
6. 機能遺伝子による大腸内細菌叢の解析 171 |
7. おわりに 172 |
第8章 昆虫の細胞内共生微生物(中鉢淳,石川統) |
1. はじめに 174 |
2. 菌細胞内共生系 175 |
2.1 菌細胞内共生系と栄養要求 175 |
2.2 アブラムシの共生細菌Buchnera aphidicola 176 |
2.3 Buchneraゲノムの特徴 177 |
2.4 一次共生体と二次共生体 178 |
2.5 WigglesworthiaとBlochmanniaのゲノム 178 |
2.6 今後注目される菌細胞内共生細菌 179 |
2.7 宿主菌細胞の役割 180 |
3. ゲスト微生物 181 |
3.1 Wolbachia pipientisによる宿主の生殖撹乱 181 |
3.2 Wolbachiaゲノム 182 |
4. まとめと展望 183 |
第9章 絶対共生微生物・アーバスキュラー菌根菌(斎藤雅典) |
1. アーバスキュラー菌根菌とは何か? 186 |
2. アーバスキュラー菌根(AM)菌のライフサイクル 186 |
3. アーバスキュラー菌根(AM)菌はなぜ培養できないか? 187 |
4. アーバスキュラー菌根(AM)菌の機能解明 : 遺伝子からアプローチする 189 |
5. アーバスキュラー菌根(AM)菌の機能解明 : 顕微鏡によるアプローチ 190 |
6. 遺伝資源としてのアーバスキュラー菌根菌 191 |
第10章 植物の内生窒素固定細菌(南澤究) |
1. はじめに 193 |
2. 根粒菌の生活環 193 |
3. 根粒バクテロイドの難培養性 195 |
4. 根粒菌の共生モードから単生モードへの切り換えの意味 197 |
5. イネ科植物体内の窒素固定エンドファイト 198 |
6. 野生のイネ科植物の分離困難な窒素固定細菌共同体 198 |
7. 植物体内で培養困難になるAzoarcus属窒素固定エンドファイト 199 |
【第3編 微生物資源としての難培養微生物】 |
第1章 eDNAによる培養困難微生物資源へのアクセス(長谷部亮) |
1. はじめに 203 |
2. eDNA,メタゲノム解析とは 203 |
3. eDNAとメタゲノム解析による研究実績と内外の研究動向 204 |
3.1 新規酵素探索 204 |
3.1.1 多糖類分解酵素 204 |
(1) セルラーゼ 204 |
(2) キシラナーゼ 204 |
(3) キチナーゼ 206 |
(4) アガラーゼ 206 |
(5) アミラーゼ 206 |
3.1.2 アルコール,有機酸分解酵素 206 |
(1) アルコール酸化還元酵素 206 |
(2) 酪酸分解酵素 207 |
3.1.3 脂質分解酵素 207 |
(1) リパーゼ 207 |
3.1.4 タンパク質分解酵素 207 |
(1) アルカリプロテアーゼ 207 |
3.1.5 難分解性有機化合物分解酵素ほか 208 |
3.2 新規生理活性物質探索 208 |
4. eDNA研究の技術的課題 208 |
4.1 塩基配列ベース研究(eDNA-PCR研究) 209 |
4.2 発現ベース研究 209 |
4.2.1 eDNA回収法 : できるだけマイルドに大きなサイズのDNA断片を得る 209 |
4.2.2 BACライブラリーの利用 : より大きなDNA断片をクローニングする 209 |
4.2.3 進むBACベクターの改良 : 大腸菌以外の宿主で発現させる 210 |
4.2.4 スクリーニング効率を上げる 210 |
5. おわりに 211 |
第2章 難培養性真核微生物のEST解析―シロアリ腸内の絶対共生性原生生物をモデルとして―(守屋繁春) |
1. 「培養されていない」微生物から遺伝子資源を探す 214 |
2. 環境cDNAライブラリー 215 |
3. シロアリの共生原生生物 215 |
4. 微生物集団からのcDNAライブラリー構築の実際 216 |
5. シロアリ腸内共生原生生物群のEST解析 219 |
6. 環境cDNAライブラリー的アプローチの問題と将来 222 |
第3章 難培養微生物をいかに系統保存化するのか(辨野義己,伊藤隆) |
1. はじめに 224 |
2. 難培養微生物とその分離・培養法 225 |
3. 牛ルーメン内難培養偏性嫌気性菌の単離・培養 226 |
4. ヒト口腔内難培養トリポネーマの単離・培養法の確立 229 |
5. 好熱性古細菌の分離・培養 229 |
6. 難培養性微生物の系統保存 232 |
7. 難培養性原核生物の命名 233 |
8. おわりに 236 |
第4章 難培養性微生物からの生物活性天然物質の探索(作田庄平) |
1. はじめに 237 |
2. eDNAを用いた放線菌のタイプII型ポリケチド生合成遺伝子の多様性解析 238 |
3. eDNA由来の生合成遺伝子を利用した天然物質の生産 239 |
4. おわりに 242 |
第5章 海綿由来の生理活性物質と共生微生物(伊藤卓也,小林資正) |
1. はじめに 244 |
2. 海洋生物由来の医薬品資源 245 |
3. 生物活性物質を生産する共生微生物の存在 247 |
4. 海洋微生物からの生物活性物質 249 |
4.1 分離例1 250 |
4.2 分離例2 250 |
4.3 分離例3 251 |
4.4 分離の応用 251 |
5. バイオテクノロジー技術を用いた難培養性共生微生物の利用 251 |
6. おわりに 253 |
第6章 醸造にかかわる難培養・複合系微生物(北垣浩志,北本勝ひこ) |
1. はじめに 255 |
2. 醸造における複合系微生物 255 |
2.1 清酒 255 |
2.1.1 酒母 255 |
(1) 生きもと系酒母 256 |
(2) 菩提きもと 257 |
(3) 速醸系酒母 258 |
2.1.2 もろみ 258 |
2.1.3 貯蔵 259 |
2.2 焼酎 259 |
2.3 ビール 260 |
2.4 ランビックビール 261 |
2.5 ウィスキー 261 |
2.6 ワイン 262 |
2.7 シェリーワイン 263 |
3. おわりに 264 |
【第1編 難培養微生物の研究方法】 |
第1章 海洋性VBNC微生物とその検出法(木暮一啓) 3 |
1. 天然水界中の細菌群集 4 |