| 序文 iii |
| 1 はじめに 1 |
| 2 培地の作成と滅菌法 5 |
| 2.1 培地の組成 5 |
| 2.2 別滅菌の注意事項 7 |
| 2.3 プレートとスラント 8 |
| 2.4 液体培地 9 |
| 2.5 オートクレーブ滅菌 11 |
| 2.6 濾過滅菌 13 |
| 2.7 乾熱滅菌 13 |
| 2.8 その他の滅菌法 13 |
| 3 無菌操作と菌株保存法 15 |
| 3.1 無菌操作 15 |
| 3.2 開放系における無菌操作 16 |
| 3.3 クリーンベンチと安全キャビネット 16 |
| 3.4 純粋分離 17 |
| 3.5 集積培養 19 |
| 3.6 植菌と単コロニー分離 19 |
| 3.7 菌株の保存法 22 |
| 3.7.1 継代培養法 22 |
| 3.7.2 軟寒天保存法 23 |
| 3.7.3 流動パラフィン重層法 23 |
| 3.7.4 凍結保存法 24 |
| 3.7.5 凍結乾燥保存法 24 |
| 4 微生物の増殖 26 |
| 4.1 微生物増殖の理論式 26 |
| 4.2 バッチ培養における微生物の増殖曲線 29 |
| 4.2.1 誘導期 29 |
| 4.2.2 対数増殖期 30 |
| 4.2.3 定常期 30 |
| 4.2.4 死滅期 30 |
| 4.3 微生物の培養方法 30 |
| 4.3.1 前培養 31 |
| 4.3.2 本培養 32 |
| 4.4 増殖過程の測定 34 |
| 4.4.1 乾燥重量 34 |
| 4.4.2 濁度 35 |
| 4.4.3 全細胞数 37 |
| 4.4.4 生菌数 38 |
| 5 顕微鏡観察 41 |
| 5.1 顕微鏡の原理と解像度 41 |
| 5.2 位相差顕微鏡 43 |
| 5.3 顕微鏡の取り扱い法 44 |
| 5.3.1 照明 44 |
| 5.3.2 試料の調製 44 |
| 5.3.3 レンズについて 45 |
| 5.3.4 マイクロメーター 45 |
| 5.3.5 保守点検 46 |
| 5.4 顕微鏡写真の撮影法 46 |
| 5.5 蛍光顕微鏡 47 |
| 5.6 電子顕微鏡 49 |
| 5.7 その他の顕微鏡 52 |
| 6 突然変異株の取得 54 |
| 6.1 突然変異体とは 54 |
| 6.2 突然変異株の種類 55 |
| 6.3 変異原処理 57 |
| 6.3.1 紫外線 58 |
| 6.3.2 化学物質 58 |
| 6.3.3 生物的突然変異誘発法 59 |
| 6.4 スクリーニング 61 |
| 6.5 突然変異体の濃縮 63 |
| 6.5.1 ペニシリンスクリーニング法 63 |
| 6.5.2 トリチウム自殺法 64 |
| 6.5.3 比重濃縮法 64 |
| 7 タンパク質の濃縮と分析 66 |
| 7.1 菌体と培地の分離 66 |
| 7.2 タンパク質の抽出と回収 67 |
| 7.2.1 超音波処理 67 |
| 7.2.2 リゾチーム処理 69 |
| 7.2.3 ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)処理 69 |
| 7.3 タンパク質の濃縮と回収 69 |
| 7.3.1 有機溶媒沈殿 70 |
| 7.3.2 硫安沈殿 70 |
| 7.3.3 トリクロロ酢酸(TCA)による沈殿 71 |
| 7.3.4 限外濾過 71 |
| 7.3.5 ポリエチレングリコール(PEG)による濃縮 72 |
| 7.4 脱塩操作 72 |
| 7.5 タンパク質の定量法 73 |
| 7.5.1 ローリー(Lowry)法 73 |
| 7.5.2 ブラッドフォード(Bradford)法 74 |
| 7.6 電気泳動法 75 |
| 7.6.1 ポリアクリルアミドゲル電気泳動法 75 |
| 7.6.2 SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動法 76 |
| 7.6.3 ポリアクリルアミドゲル等電点電気泳動法 77 |
| 8 遺伝子工学的手法 81 |
| 8.1 遺伝子工学で用いられる酵素 81 |
| 8.1.1 制限酵素 83 |
| 8.1.2 DNAリガーゼ 84 |
| 8.1.3 DNAポリメラーゼ 85 |
| 8.1.4 その他の酵素 85 |
| 8.2 染色体DNAの抽出 86 |
| 8.3 大腸菌のためのベクター 87 |
| 8.3.1 宿主とベクター 87 |
| 8.3.2 プラスミドベクター 88 |
| 8.3.3 ファージベクター 88 |
| 8.4 大腸菌への遺伝子導入 88 |
| 8.4.1 プラスミドによる形質転換 88 |
| 8.4.2 ファージを用いた形質導入 89 |
| 8.5 遺伝子ライブラリーのスクリーニング 89 |
| 8.6 DNA塩基配列の決定法 90 |
| 8.6.1 ジデオキシ法(Sanger法) 90 |
| 8.6.2 化学分解法(Maxam-Gilbert法) 92 |
| 8.7 PCR法による遺伝子の増幅 92 |
| 9 免疫学的手法 95 |
| 9.1 抗体の調製 96 |
| 9.1.1 抗血清とモノクローナル抗体 96 |
| 9.1.2 抗血清の調製 96 |
| 9.1.3 モノクローナル抗体の調製 97 |
| 9.2 抗体による抗原の検出と定量 98 |
| 9.2.1 免疫拡散法 98 |
| 9.2.2 免疫凝集反応 99 |
| 9.2.3 ELISA 100 |
| 9.2.4 ウェスタンブロット法 100 |
| 9.3 抗体を用いた抗原の精製 102 |
| 10 微生物の同定 103 |
| 10.1 微生物の命名法 103 |
| 10.2 原核生物と真核生物 104 |
| 10.3 微生物の分類 104 |
| 10.4 形態観察I(肉眼所見) 107 |
| 10.5 形態観察II(顕微鏡観察) 107 |
| 10.6 真菌類の分類 109 |
| 10.7 細菌の分類・同定 111 |
| 11 バイオハザード 116 |
| 11.1 病原性微生物取り扱いの安全対策 117 |
| 11.1.1 病原体などの危険度分類 117 |
| 11.1.2 物理的封じ込め 117 |
| 11.2 組換えDNA実験の安全対策 119 |
| 11.2.1 組換えDNA実験指針 119 |
| 11.2.2 物理的封じ込め 119 |
| 11.2.3 生物学的封じ込め 120 |
| 11.2.4 組換えDNA実験の実施 122 |
| 12 各種機器の取り扱い 123 |
| 12.1 天びん 123 |
| 12.2 pHメーター 124 |
| 12.2.1 ガラス電極の原理 124 |
| 12.2.2 ガラス電極pHメーターの使用法 126 |
| 12.3 遠心分離機 126 |
| 12.4 分光光度計 129 |
| 12.4.1 ランバート・ベールの法則 129 |
| 12.4.2 分光光度計の構成 130 |
| 12.4.3 吸光度の測定 131 |
| 12.5 マイクロピペット 131 |
| 13 付録 133 |
| 索引 139 |
